绿脓杆菌外毒素A抗原的制备与纯化

目的：制备绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）抗原。方法：用胰酶酪蛋白大豆肉汤（Ｔｒｙｐｔｉｃｓｏｙｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ），于３２℃水浴１２０次／ｍｉｎ振荡培养绿脓杆菌ＰＡ１０３株，其培养物经７０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清用７０％饱和硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析，ＤＥＡＥ－５２（ＤＥ－５２）柱层析，羟基磷灰石柱层析制备ＰＥＡ。结果：纯化的ＰＥＡ经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）为一条带，分子量为Ｍｒ（６６～６８）×１０３ｕ。环状沉淀试验，琼脂双向扩散试验，酶联免疫吸附试验和免疫印迹分析表明本室纯化的ＰＥＡ，抗原性和分子量均与文献报道一致。结论：用本方法制备ＰＥＡ，避免了对ＤＥ－５２的反复再生，缩短了实验流程，对保持ＰＥＡ的生物活性有利。