高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立

被引：3

作者：

孔留五 ^{[1
,2
]}

张桂红 ^{[1
]}

姜增固 ^{[2
]}

康艳梅 ^{[1
]}

秦宏阳 ^{[1
]}

曹宗喜 ^{[1
]}

张得玉 ^{[1
]}

张翔峰 ^{[1
]}

机构：

[1] 华南农业大学兽医学院

[2] 广州市良种猪场

来源：

广东畜牧兽医科技 | 2009年 / 34卷 / 06期

基金：

广东省科技计划; 广东省自然科学基金;

关键词：

PRRSV; 实时荧光定量; 鉴别诊断; 绝对含量;

D O I：

暂无

中图分类号：

S854.43 [];

学科分类号：

摘要：

根据GenBank收录的PRRSV基因序列,利用PRRSV经典变异株与缺失变异株NSP2基因序列特点,设计合成两对特异性引物,经RT-PCR扩增后,用T4连接酶将目的片段与pMD18-T载体连接,并转化到大肠杆菌DH-5a株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV缺失变异株与经典变异株的阳性重组质粒。将重组标准质粒进行10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR法(Real-timePCR),建立了PRRSV缺失变异株与经典变异株的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为鉴别诊断及分析PRRSV缺失变异株与经典变异株感染猪体内病毒的绝对含量提供了技术手段。

引用

页码：25 / 29

页数：5

共 2 条

[1]

Serologic marker candidates identified among B-cell linear epitopes of Nsp2 and structural proteins of a North American strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus [J].