半夏块茎高质量总RNA提取的一种有效方法

目的:探讨一种有效提取半夏块茎总RNA方法。方法:以半夏试管苗的叶片、叶柄和块茎为试验材料,将常规的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法做了改进,在RNA提取缓冲液中加入高浓度的β-巯基乙醇以除去酚类物质,用酸酚/氯仿抽提去除蛋白质污染,以及利用异丙醇和醋酸钠联合沉淀多糖等手段,建立了一种简单实用的从富含多酚类和多糖等物质的植物材料中提取总RNA的方法。结果:该方法所提RNA的A260/A230均大于2.0,A260/A280的值为1.7～2.0,电泳条带清晰,RNA完整性好。结论:利用本方法提取的半夏试管小块茎总RNA具有很高的质量和纯度,且得率很高,完全满足后续的DDRT-PCR和反向Northern blotting等分子生物学研究,而且简单经济、实验结果稳定,重复性好,适合富含多酚类和多糖等物质的药用植物组织总RNA的提取。