神经干细胞原代培养方法的优化

被引：5

作者：

兰艳纤 ^{[1
]}

李金恒 ^{[1
]}

王克万 ^{[2
]}

王勇 ^{[3
]}

机构：

[1] 南方医科大学南京军区南京总医院药理科

[2] 南方医科大学南方医院神经外科

[3] 南方医科大学珠江医院药剂科

来源：

中华神经医学杂志 | 2011年 / 05期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

神经干细胞; 海马; 胰酶; 细胞增殖; 细胞凋亡;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q42 [神经生理学]; Q813 [细胞工程];

学科分类号：

071006 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的探讨低浓度胰酶不同消化分离时间对体外培养新生大鼠海马NSCs增殖与凋亡的影响。方法取出生24 h内SD大鼠海马组织,以1.25 g/L胰酶37℃分别消化5、10、15、20和25 min(依次为A～E组),获得单细胞悬液后进行培养。通过台盼蓝染色计数、细胞形态观察和神经球数目比较不同消化时间对NSCs活力和生长的影响;用5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测NSCs的增殖能力;用免疫荧光细胞化学法检测BrdU、nestin的表达;用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果原代和传代培养的NSCs都能快速增殖并形成神经球;免疫荧光染色结果显示神经球细胞均表达NSCs特异性标志物nestin;所获得的细胞能将BrdU结合到细胞核中;各组培养3、5、7 d后,C组(消化15min)NSCs成球数最多,BrdU标记克隆率最高,细胞凋亡率最低,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外分离培养的新生大鼠海马NSCs具有增殖能力,1.25 g/L胰酶在不同消化时间对NSCs增殖能力和凋亡率的影响有所不同,消化时间过长或过短都会抑制NSCs增殖,诱导NSCs凋亡,且消化时间越长NSCs的凋亡率越高。

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页码：456 / 460

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