丹参酮ⅡA抗心肌细胞氧化应激作用及抗增殖蛋白功能研究

目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其对抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)表达的影响,研究PHB蛋白在心肌细胞氧化应激中的作用。方法:实验组分为正常对照组、氧化应激组、丹参酮ⅡA高、中、低剂量组、siRNA组、siRNA+氧化应激组、siRNA阴性对照组。采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200μmol·L-1过氧化氢作用2 h模拟心肌细胞氧化应激损伤,心肌细胞在氧化应激前给予丹参酮ⅡA(1×10-4,5×10-5,1×10-5 mol·L-1)预先干预24 h。采用PHB特异性的siRNA干扰心肌细胞PHB蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率、[Ca2+]i及心肌细胞线粒体膜电位的变化,Western blotting检测PHB蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,氧化应激组心肌细胞经200μmol·L-1过氧化氢作用2 h后,PHB蛋白表达显著增加,细胞内游离钙浓度、凋亡率显著增高,线粒体膜电位显著降低。与氧化应激组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度及细胞凋亡率,增加线粒体膜电位,降低PHB蛋白表达水平。与siRNA阴性对照组比较,siRNA组心肌细胞内PHB蛋白表达可被显著抑制,且细胞内游离钙浓度和细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著降低。结论:PHB蛋白在心肌细胞氧化应激中可代偿性增加,对心肌细胞具有保护作用。丹参酮ⅡA可减少氧化应激损伤心肌细胞内PHB蛋白表达,其机制可能与丹参酮ⅡA减轻心肌细胞氧化应激损伤从而减少心肌细胞自身代偿性作用有关。