HSP70高表达的T24细胞克隆筛选及其生物学特性

目的　筛选耐热 T2 4细胞亚克隆 ,研究其生物学特性变化 .方法　用热暴露筛选 ,联合应用免疫荧光化学方法及流式细胞仪筛选高表达 HSP70的 T2 4细胞亚克隆 ,计数法测定其细胞生长曲线及细胞倍增时间 ,流式细胞仪分析其细胞周期的变化 .分子生物学方法及细胞化学方法观察有无凋亡出现 .结果　有限稀释法筛选获取耐热 T2 4单克隆细胞株(Hr T2 4)共 2 6株 ,应用免疫荧光法筛选出 HSP70阳性克隆 12株 ,取荧光较强的两株命名为 Hr T2 4e,Hr T2 4j,FCM(平均荧光强度为 0 . 2 9)检测 HSPs分子的阳性表达率 T2 4,Hr T2 4e,Hr T2 4j分别为 2 .4% ,37.6 % ,6 5 .8% .细胞周期分析显示 T2 4,Hr T2 4e,Hr T2 4j增殖指数 (proliferation index,PI分别为44 .3% ,39.0 % ,38.5 % ,Hr T2 4e与 T2 4相比差异有显著意义(Yates corrected,χ2 =5 .5 6 ,P=0 .0 183) ,Hr T2 4e与 T2 4j相比差异无显著意义 (Yates corrected,χ2 =0 .0 3,P=0 .85 43) .Hr T2 4e与 Hr T2 4j凋亡率分别为 4.7% ,5 .9% .分子生物学方法观察到 DNA凋亡梯带出现 ,细胞化学方法观察到凋亡小体 .结论　 Hr T2 4细胞 HSP70表达增加 ,出现了一定的增殖抑制现象 ,同时观察到细胞凋亡 ,推测它们有较好的免疫原性