重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究

被引：2

作者：

李学义

朱平

王彦宏

樊春梅

黄向阳

陈庆平

机构：

[1] 第四军医大学西京医院临床免疫科

[2] 西安市第五人民医院风湿科

[3] 西安市第五人民医院风湿科西安

[4] 西安

来源：

中华微生物学和免疫学杂志 | 2003年 / 02期

关键词：

类风湿关节炎; Ⅱ型胶原; 重组人Ⅱ型胶原250-270多肽; T细胞增殖;

D O I：

暂无

中图分类号：

R593.22 [类风湿性关节炎];

学科分类号：

1002 ; 100201 ;

摘要：

目的　表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原 2 5 0 2 70多肽 (recombinanthumancollagentypeⅡpeptide 2 5 0 2 70 ,rhCⅡ 2 5 0 2 70 )并研究其对类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis ,RA)患者外周血单个核细胞 (PBMC)和关节滑液单个核细胞 (SFMC)中特异性T细胞的活化作用。方法　利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ 2 5 0 2 70多聚基因的表达载体pGEX 4T 1,转化E .coliBL2 1,融合表达目的蛋白 ,经GlutathioneSepharose○R4B亲和层析柱分离纯化 ,12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量 (Mr)和纯度。以不同浓度 (0 .1、1.0、10、10 0、10 0 0 μg/ml)的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70和化学合成的CⅡ 2 5 0 2 70刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC ,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照 ,流式细胞仪测定刺激前后 2组培养细胞中T细胞CD6 9的表达率 ,以分析其对特异性T细胞的活化作用。结果　融合表达的目的产物经SDS PAGE分析 ,相对分子质量 (Mr)大小约为 43× 10 3,与预期相符。分离纯化的 6聚rhCⅡ 2 5 0 2 70经SDS PAGE凝胶薄层扫描 ,纯度为 89% ,浓度为 2 .1mg/ml。FACS分析 :经 10 0 μg/ml浓度的 6×rhCⅡ2 5 0 2 70刺激 3d

引用

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页数：3

共 6 条

[1]

精编分子生物学试验指南. 王海林译. 科学技术出版社 . 1998

[2]

人类Ⅱ型胶原蛋白活性肽段多聚基因的构建和表达. 王宏坤,朱平,赵旭东,等. 细胞与分子免疫学杂志 . 2000

[3]

Effects of oral administration of type Ⅱ collagen on rheumatoid arthritis. Trentham DE,Dynesius-Trentham RA,Orav EJ,et al. Science . 1993

[4]

Characterization of a tolerogenic T cell epitope of type Ⅱcollagen and its relevance to collagen-induced arthritis. Myers LK,Terato CJ,Griffiths MM,et al. J Immunol . 1992

[5]

Identification of an immuno-suppressive epitope of typeⅡcollagen that confers protection against collageninduced arthritis. Myers LK,Stuart TR,Seyer JM,et al. The Journal of Experimental Medicine . 1989

[6]

Synthetic peptides that inhibit binding of the collagen type Ⅱ 261-273 epitope to rheumatoid arthritis-associated HLA-DR1 and-DR4 molecules and collagen-specific Tcell responses. Fridkis-Hareli M,Rosloniec EF,Fugger L,et al. Human Immunology . 2000

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