维生素D调节坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠道上皮occludin蛋白表达的研究

目的检测坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis, NEC)新生大鼠肠道上皮occludin蛋白的定位及表达情况, 探索维生素D处理对NEC新生大鼠的保护作用及对occludin蛋白表达的影响。方法 SPF级不同窝别新生48 h的Wistar大鼠60只, 采用随机数字表法随机分为4组:母乳喂养+对照组10只, 母乳喂养+维生素D组10只, NEC+对照组20只, NEC+维生素D组20只。NEC模型:将生后48 h的仔鼠与母鼠隔离, 采用鼠乳代乳品人工喂养+缺氧+寒冷刺激处理;维生素D处理:分别于NEC造模前30 min, 造模后1 d、2 d腹腔注射活性维生素D(帕立骨化醇)。各组大鼠分别在实验72 h后处死取材, 选取回肠组织采用HE染色观察肠腔结构改变并做Nadler病理评分, 采用免疫荧光染色观察occludin蛋白在肠上皮的定位和表达情况, 采用Western blot方法检测肠道黏膜组织occludin蛋白的表达量并做统计学分析。结果 HE染色可见NEC大鼠的肠腔组织结构破坏, 黏膜下或肌层分离, 部分绒毛脱落, 甚至肠绒毛消失, 肠上皮脱落伴肠坏死, Nadler病理评分为(2.90±0.23)分;维生素D处理的NEC大鼠上述病理表现较NEC大鼠减轻, Nadler病理评分为(1.70±0.21)分, 两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光显示NEC大鼠肠道上皮细胞间occludin表达明显减少、稀疏, 呈现不连续或点状表达, 维生素D处理的NEC大鼠肠道上皮细胞间occludin表达较NEC对照组大鼠明显增多, 基本呈均匀、连续的表达。Western blot显示NEC大鼠肠道黏膜组织的occludin表达明显减少, 维生素D处理可以明显增加occludin的表达(P<0.01)。结论 NEC模型大鼠肠道上皮紧密连接相关蛋白occludin表达明显降低, 维生素D处理可以通过上调肠道上皮occludin的表达来抑制NEC的发生发展。