甘草查尔酮A对NLRP3炎症小体的调控作用及机制初探

利用小鼠原代骨髓巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages, BMDMs）构建NOD （nucleotide binding oligomerization domain）样受体家族3 （NOD-like receptors, NLRP3）炎症小体活化模型,探讨甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对NLRP3炎症小体的调控作用及初步机制。脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）预处理BMDMs细胞后给予LCA,分别再给予三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）和尼日利亚菌素（nigericin）刺激构建NLRP3炎症小体活化模型,采用Caspase-Glo? 1 Inflammasome Assay和ELISA检测细胞培养上清液中半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1 （caspase-1）的活性、白细胞介素（interleukin, IL）-1β和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌;通过免疫印迹法（Western blot）检测细胞上清中的成熟IL-1β、caspase-1的产生及细胞裂解液中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein, ASC）和pro-caspase-1、pro-IL-1β的表达。Caspase-Glo? 1 Inflammasome Assay和ELISA结果表明,LCA能显著抑制ATP和nigericin诱导的NLRP3炎症小体组成蛋白pro-caspase-1和pro-IL-1β剪切活化,同时对细菌鞭毛蛋白（Lfn-Flic）诱导的NOD样受体家族半胱天冬酶激活募集结构域4 （NOD-like receptor containing a caspase activating and recruitment domain 4, NLRC4）炎症小体活性也具轻微抑制作用,但是对poly（dA:dT）诱导的黑色素瘤缺乏因子2 （the absent in melanoma 2, AIM2）炎症小体活化无影响。免疫印迹法检测显示LCA对NF-κB介导的NLRP3炎症小体组成蛋白NLRP3和pro-IL-1β表达无影响。综上,研究表明LCA可通过抑制pro-caspase-1剪切,阻断caspase p20介导的pro-IL-1β的剪切成熟,最终抑制NLRP3炎症小体介导免疫炎症反应。本研究在中国人民解放军第302医院伦理委员会审批下进行,为甘草及LCA防治NLRP3炎症小体相关疾病提供了依据。