谷胱甘肽合成酶在大肠杆菌中的高效表达及性质

在成功构建了谷胱甘肽 ( GSH)合成酶基因表达质粒 ( p Trc- gsh)的基础上 ,对不同大肠杆菌宿主菌进行了比较 ,筛选出高效、稳定表达 GSH合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明 :重组工程菌 E.coli BL.2 1 ( p Trc- gsh)表达量最高 ,质粒稳定性好 ,以 5%接种量于37°C、p H7.2培养至 OD550 =0 .5左右 ,加入诱导剂 IPTG( 0 .1 mmol/ L) ,同时切换培养条件为 34°C、p H6 .7的两步培养法 ,培养 3h后 ,GSH酶表达量达菌体总蛋白的 2 5% ,干细胞酶活为 1 1 4.9μg/ mg·min,其最适 p H为 6 .7,最适温度为 37°C。