survivin反义寡核苷酸提高人肺腺癌A549耐药细胞系对顺铂敏感性的研究

目的探讨存活素反义寡核苷酸（ASODN）体外转染对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/ CDDP凋亡及其对顺铂（CDDP）敏感性的影响。方法常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin ASODN转染细胞,采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测survivin mRNA及蛋白表达。通过形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、caspase-3酶活性及细胞凋亡率（AI）的测定,评价细胞凋亡程度。采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC50)及耐药倍数（RI）。结果转染组survivin mRNA及蛋白表达下调明显,分别达41．56%和0．864±0．045,与其他各组比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。细胞形态学显示有细胞凋亡改变,表现为细胞核固缩、核边集和核碎裂等；DNA凝胶电泳可见DNA梯形条带；ASODN转染组细胞凋亡率和caspase-3相对活性分别增高至34．03%和1．1298±0．2502,而ASODN+CDDP组增高更为明显,分别达65．85%和1．6805±0．2758,与其他各组比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。ASODN转染组和ASODN+CDDP组生长抑制率分别增高至59．3%和83．7%（P＜0．05）；而ASODN转染组细胞对CDDP的IC50由对照组的（225．03±10．59）μmol/L减低至（158．84±4．26）μmol/L,RI由11．9减至8．4。结论survivin ASODN通过下调survivin的表达,自身诱导了细胞凋亡,并逆转细胞对CDDP诱导的细胞凋亡的耐受,降低凋亡阈值,从而增强了人肺腺癌细胞对CDDP的敏感性。