目的建立RP-HPLC测定制川乌中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱含量的方法。方法采用Zorbax Eclipse XDB-C8色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);以20mmol·L-1三乙胺溶液(磷酸调pH3)-甲醇(95:5)为流动相梯度洗脱;检测波长235nm;柱温30℃;流速1.0mL·min-1。结果三种生物碱得到有效分离,回归方程分别为:Y乌头碱=1.257×104X+0.222(r=0.9999)、Y次乌头碱=1.302×104X+0.293(r=0.9997)、Y新乌头碱=1.295×104X-0.119(r=0.9999);线性范围为:0.5~20.0μg·mL-1;平均加样回收率分别为98.42%、97.51%、98.33%;RSD分别为1.05%、1.07%、1.05%(n=6)。结论所建方法对制川乌中生物碱的含量控制具参考意义。