胞内氯离子通道蛋白1基因沉默对小鼠肝癌细胞株增殖及侵袭能力的影响

被引：13

作者：

李荣宽 ^{[1
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唐建武 ^{[2
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张军 ^{[2
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王绍清 ^{[2
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王梅 ^{[2
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王波 ^{[2
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张宇宏 ^{[3
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机构：

[1] 大连医科大学附属第二医院消化内科

[2] 大连医科大学病理学教研室

[3] 大连医科大学附属第二医院超声科

来源：

中华肝脏病杂志 | 2010年 / 02期

关键词：

癌,肝细胞; 增殖; 侵袭; RNA干扰; 氯化物通道;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100112 [医学生物化学与分子生物学];

摘要：

目的合成和筛选有效抑制细胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因的shRNA序列,构建表达质粒,并进一步研究CLIC1基因的表达被抑制后小鼠肝癌细胞株Hca-F细胞增殖及侵袭能力的变化。方法设计并合成3条理论上最佳的siRNA序列,进而将相应的双链DNA插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,以脂质体Lipofectamine 2000将DNA质粒稳定转染至小鼠Hca-F细胞中,收取细胞进行逆转录多聚酶链反应分析各组的CLIC1 mRNA表达水平,选出最佳干扰序列。应用细胞计数试剂盒检测最佳干扰序列表达质粒稳定转染的Hca-F细胞,对比观察其干扰前后增殖情况的变化;应用transwell小室检测其侵袭能力的变化。对研究数据应用统计学软件SPSS13.0进行方差分析。结果靶向CLIC1 mRNA的3个shRNA重组质粒载体经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致。经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。稳定转染pGPU6/GFP/Neo-shRNA-3表达质粒的Hca-F细胞对其CLIC1 mRNA抑制效果明显,抑制率达42.4%。经该表达质粒的干扰后,Hca-F细胞的增殖能力明显增强,侵袭能力显著下降,空白对照组、无关序列处理组、shRNA干扰组的穿膜细胞个数分别为98.93±5.00、96.27±2.60、50.73±3.89,P值均<0.01。结论pGPU6/GFP/Neo-shRNA-3表达质粒能高效地抑制小鼠Hca-F细胞中CLIC1 mRNA的表达,CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其侵袭的作用。

引用

共 6 条

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