酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母

被引：53

作者：

李剑

马梅

饶凯锋

王子健

机构：

[1] 中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室

来源：

生态毒理学报 | 2008年 / 01期

关键词：

酵母双杂交; 人雌激素受体; 重组基因酵母; 类/抗雌激素活性;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类/抗雌激素化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ER LBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGAD424-GRIP1和pGAD424-SRC1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,分别构建两种ER双杂交酵母ER+GRIP1和ER+SRC1.考察双杂交酵母与不同激素:17β-雌二醇(E2)、二氢睾酮(DHT)、孕酮(PG)以及三碘甲状腺原氨酸(T3)的结合情况,并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(4-OHT)与酵母的相互作用.结果表明:ER+GRIP1和ER+SRC1酵母均能够专一性的和E2结合,并存在显著的剂量-效应关系,E2对ER+GRIP1和ER+SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7.3×10-11mol·L-1和1.5×10-10mol·L-1,其中ER+GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER+SRC1酵母细胞.4-OHT能够抑制E2诱导ER+GRIP1酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,IC50值为1.0×10-7mol·L-1.表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类/抗雌激素活性.

引用

页码：21 / 26

页数：6

共 7 条

[1]

环境内分泌干扰物低剂量-效应研究进展 [J].

卫立 ;

张洪昌 ;

张爱茜 ;

尹大强 .

生态毒理学报, 2007, (01) :25-31

[2]

基于H4IIE细胞株测试间接雌激素效应物质的代谢活化方法 [J].

李剑 ;

崔青 ;

马梅 ;

饶凯锋 ;

王子健 .

环境科学学报, 2006, (08) :1320-1325

[3]

环境雌激素重组酵母测评系统的建立 [J].

何世华 ;

梁增辉 ;

战威 ;

贾凌志 ;

晁福寰 .

环境与健康杂志, 2002, (01) :57-59

[4]

Applicability of a yeast oestrogen screen for the detection of oestrogen-like activities in environmental samples[J] Klaus Rehmann;Karl-Werner Schramm;Antonius A. Kettrup Chemosphere 1999,

[5]

Evaluation of Chemicals with Endocrine Modulating Activity in a Yeast-Based Steroid Hormone Receptor Gene Transcription Assay[J] Toxicology and Applied Pharmacology 1997,

[6]

The nuclear receptor superfamily: The second decade[J] David J. Mangelsdorf;Carl Thummel;Miguel Beato;Peter Herrlich;Günther Schütz;Kazuhiko Umesono;Bruce Blumberg;Philippe Kastner;Manuel Mark;Pierre Chambon;Ronald M. Evans Cell 1995,

[7]

药理学进展[M] 金正均等主编; 人民卫生出版社 1997,

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