β-arrestin 2抗基因RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

被引：4

作者：

卜慧莲 ^{[1
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温晓岩 ^{[2
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刘希江 ^{[1
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徐懋 ^{[3
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曹菲 ^{[1
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田学愎 ^{[1
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杨辉 ^{[1
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高峰 ^{[1
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田玉科 ^{[1
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机构：

[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室

[2] 山东省聊城市人民医院检验科

[3] 北京大学第三医院麻醉科

来源：

华中科技大学学报(医学版) | 2011年 / 40卷 / 01期

基金：

高等学校博士学科点专项科研基金;

关键词：

基因沉默; 抗基因RNA; 慢病毒; β-arrestin2;

D O I：

暂无

中图分类号：

R373 [人体病毒学（致病病毒）];

学科分类号：

100123 [人体微生态学];

摘要：

目的构建携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法将线性化的慢病毒载体pGC-FU与抗基因RNA在In-Fusion交换酶作用下构建目的质粒pGC-agRNA,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞NG108-15细胞的转染效率。结果抗基因RNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-FU,病毒滴度为2×109TU/mL。用该慢病毒感染NG108-15细胞,当感染复数(MOI)为100时,感染效率大于95%。结论成功构建了携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体,为研究β-arrestin 2在μ阿片受体调控机制中的作用提供了有效的研究工具,而且为抗基因RNA技术应用于体内外实验研究奠定了基础。

引用

页码：37 / 40+46 +46

页数：5

共 8 条

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