胰岛素样生长因子Ⅰ对三维培养兔关节软骨细胞增殖和表型的影响

目的:研究胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF -Ⅰ)对藻酸盐凝胶三维培养条件下兔关节软骨细胞的影响。方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的兔关节软骨细胞,在单层培养条件下增殖至P2代;将P2代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培养介质,进行三维培养,另一组在进行三维培养的同时,在培养液中加入IGF -Ⅰ50 ng/ml,绘制各组细胞生长曲线,并与单层培养对照组细胞进行比较。将培养细胞行Ⅱ型胶原免疫组织化学检测,H E染色观察细胞形态。进行不同浓度IGF- Ⅰ作用下的三维培养软骨细胞MTT检测,观察0、25、50、75、100 ng/ml IGF0 Ⅰ对三维培养软骨细胞各时间点的促增殖作用。结果:IGF 0Ⅰ可明显刺激三维培养条件下关节软骨细胞增殖及集落形成;不同浓度的IGF 0Ⅰ均可促进关节软骨细胞增殖,以50 ng/ml浓度时D490值最高。培养6周后从凝胶体系中收获细胞的软骨特异性Ⅱ型胶原表达水平较转入三维体系前未见降低。结论:IGF Ⅰ可明显刺激藻酸盐三维培养条件下的关节软骨细胞增殖及集落形成,且细胞表型稳定。