熔解曲线分析检测大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌方法的构建

目的构建熔解曲线分析法检测大肠埃希菌、嗜麦芽单胞菌。方法针对大肠埃希菌的16SrRNA、嗜麦芽单胞菌的促族酶B亚单位(gyrB)基因设计种特异性引物。构建熔解曲线分析法,并进行特异性验证。检测不同拷贝浓度稀释液进行敏感性分析。检测临床分离目标菌各20株,进行稳定性评价。结果特异性验证显示,目标检测菌种均有特异性的熔解曲线,融点温度(Tm)值分别为84.73、82.84℃。可检测到的拷贝浓度稀释液分别为3.56×103、1.21×104 copy/mL。稳定性评价的结果显示,Tm值(x±s)变化范围窄小,差异有统计学意义。结论所构建方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性。并具有快速、简便、成本低廉的特点,可用于临床样本的检测。