人基质金属蛋白酶-9在酵母Pichia pastoris中的表达

被引：7

作者：

颜春洪

李春海

田方

朱运峰

孙丽亚

机构：

[1] 军事医学科学院附属医院!北京,军事医学科学院附属医院!北京,军事医学科学院附属医院!北京,军事医学科学院附属医院!北京,军事医学科学院附属医院!北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2000年 / 02期

关键词：

基质金属蛋白酶-9; 酵母表达系统; 重组蛋白; 底物性质; 自剪切;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2000.02.009

中图分类号：

Q786 [基因的表达];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

基质金属蛋白酶 - 9( MMP- 9)可促进恶性肿瘤的侵袭、转移 ,并在组织重建、胚胎发育以及伤口愈合等生理过程中发挥重要作用 .为研究这一蛋白的性质 ,并以之为靶标筛选抗肿瘤转移药物 ,在酵母 Pichia pastoris中实现了重组人 MMP- 9蛋白的高效、高活性、分泌表达 .首先用 PCR扩增了 MMP- 9基因编码区 (不含信号肽序列 ) ,经测序证实后 ,将其插入 p PIC9质粒中 ,构建表达载体 .用 Li C1 - PEG法转化酵母后 ,采用明胶 -酶谱法筛选获得 5株高效分泌表达 MMP- 9的克隆 ,经PCR证实 MMP- 9基因整合在阳性克隆的染色体中 .重组蛋白分子量为 93k D,表达量为 1 0 mg/L.重组蛋白可水解明胶及型胶原 ,并可经有机汞 APMA诱导发生自剪切 ,转换成 85k D的激活形式 ,表明重组蛋白具有与天然人 MMP- 9蛋白相似的底物水解活性和自剪切激活特性 .

引用

页码：194 / 199

页数：6

共 3 条

[1] Secretion, purification and activity of two recombinant pepper endo-β-1,4-glucanases expressed in the yeast Pichia pastoris [J].