LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr

被引：6

作者：

冯学泉 ^{[1
]}

徐军 ^{[2
]}

王金环 ^{[1
]}

徐新女 ^{[3
]}

王淑杰 ^{[3
]}

机构：

[1] 天津医科大学一中心临床学院神经外科

[2] 南开大学医学院

[3] 卫生部危重病急救医学重点实验室

来源：

天津医药 | 2008年 / 11期

关键词：

腺病毒科; 质粒; 聚合酶链反应; HIV;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。

引用

页码：840 / 842

页数：3

共 4 条

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[4]

Cytoplasmic retention of HIV-1 regulatory protein Vpr by protein-protein interaction with a novel human cytoplasmic protein VprBP[J] . Shangao Zhang,Yunfeng Feng,Opendra Narayan,Ling-Jun Zhao.Gene . 2001 (1)

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