昆明山海棠与类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡

背景:昆明山海棠应用于类风湿关节炎治疗已被证实有确切疗效,但对于其作用机制目前尚不明确。目的:验证昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和成纤维样细胞体外增殖活性及对其凋亡影响,分析其剂量效应关系。设计、时间及地点:细胞学体外分组对照实验,于2003-08/2007-06在汕头大学医学院第一附属医院中心实验室和南方医科大学细胞生物实验室完成。材料:类风湿关节炎6例及正常滑膜组织3例,来源于汕头大学医学院第一附属医院骨科和南方医院脊柱骨病科患者术中获得的标本。昆明山海棠制备水提取液,含生药0.667g/mL。方法:收集获得的滑膜组织,通过消化法获得原代类风湿关节炎及正常滑膜细胞,第2～4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68+细胞和CD68-细胞,在接种72h后加入实验各组分别在培养液中加入最终体积分数分别为5,10,20mL/L的昆明山海棠药液处理24h和48h。同时设立不加药物的阴性对照及不加细胞空白对照。主要观察指标:相差倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测和TUNEL法检测细胞凋亡。结果:分选后滑膜CD68-细胞为成纤维样细胞,滑膜CD68+细胞为滑膜巨噬样细胞。施予干预因素后,各组有部分细胞体积缩小,胞膜皱缩,微绒毛和伪足减少或消失,部分细胞可见团块脱落形成凋亡小体。当昆明山海棠体积分数为2%时,各组细胞均有不同程度抑制,显示昆明山海棠有细胞毒性,对类风湿关节炎滑膜CD68-、CD68+细胞的抑制效应和诱导细胞效应强于同种正常滑膜细胞(P<0.01)。在药物体积分数为1%时,对类风湿关节炎滑膜细胞有明显抑制效应(P<0.01)。昆明山海棠对诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用有明显时间依赖性和剂量依赖性,且凋亡率与相同条件下的抑制率表现出较好的直线相关关系(r=0.497,P<0.01)。结论:昆明山海棠对于类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和滑膜成纤维样细胞有诱导凋亡和明显抑制异常增殖作用。在一定浓度下,昆明山海棠对于正常滑膜细胞毒性较小且对类风湿关节炎滑膜细胞的有较明显抑制异常增殖和诱导细胞凋亡的效应。