自噬对大肠癌LoVo/Adr细胞多药耐药性的影响

目的探讨大肠癌耐药LoVo/Adr细胞自噬状态对多药耐药(MDR)的影响。方法体外培养LoVo/Adr细胞,应用透射电镜观察细胞自噬体形成情况,采用MDC荧光染色及流式细胞术定量分析自噬率,MTT法测定细胞对阿霉素(ADR)的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR检测MDR1基因的mRNA水平,Western blotting检测P糖蛋白(P-gp)表达水平。结果 LoVo/Adr细胞中可见散在自噬体或点状绿色荧光分布,自噬率为3.1%±0.5%;ADR和雷帕霉素(RAPA)单独作用时,自噬体明显增多,自噬率分别为33.6%±5.1%和45.2%±6.1%(P<0.05),ADR和RAPA联合作用时可见大量自噬体形成,自噬率为76.2%±7.4%,显著高于二者单独作用时(P<0.05);LoVo/Adr细胞对ADR的IC50为3.05±0.52mg/L,RAPA作用后IC50降至1.12±0.21mg/L(P<0.01),RAPA具有逆转耐药的作用,逆转倍率为2.26倍;LoVo/Adr细胞MDR1 mRNA和P-gp蛋白呈高表达,在RAPA作用下,MDR1 mRNA表达量由1.42±0.31降至0.54±0.20(P<0.05),P-gp蛋白表达量由0.67±0.14降至0.15±0.08(P<0.01),RAPA显著下调了MDR1 mRNA及蛋白的表达。结论多药耐药的LoVo/Adr细胞呈低自噬状态,RAPA可通过提高细胞的自噬活性而逆转MDR,逆转途径可能与促进细胞自噬性死亡和下调MDR1基因的表达有关。