有丝分裂阻滞缺陷蛋白2选择性剪接体MAD2β在胃癌细胞多药耐药机制中的作用

目的　观察有丝分裂阻滞缺陷蛋白 2 (mitoticarrestdeficientprotein 2 ,MAD2 )基因的选择性剪接体MAD2 β在人胃癌多药耐药性形成过程中的作用机制。 方法　从耐阿霉素人胃癌细胞系SGC790 1/ADR中提取总RNA ,通过RT PCR获得MAD2 β全长编码cDNA ,并克隆至pUCm T载体 ,正向亚克隆插入真核表达载体pcDNA3.1中。以脂质体介导pcDNA3.1/MAD2 β真核表达载体转染胃腺癌细胞SGC790 1。以体外药敏试验检测转染MAD2 β的胃癌细胞及其对照组细胞对化疗药物的敏感性。通过流式细胞仪检测MAD2 β基因转染组和对照组胃癌细胞在细胞周期中的分布和细胞内阿霉素的荧光强度。结果　RT PCR扩增获得约 0 .5 3kb片段 ,DNA序列测定证实为MAD2的一种选择性剪接形式 ,命名为MAD2 β。重组正义真核表达载体pcDNA3.1/MAD2 β瞬时转染SGC790 1细胞 ,经MTT法证实 ,转染细胞SGC790 1/MAD2 β对化疗药物阿霉素、长春新碱和丝裂霉素的耐药性增强。与SGC790 1/pcDNA3.1比较 ,阿霉素大剂量短期作用后 ,SGC790 1/MAD2 β细胞内的平均荧光强度比对照组低 (P <0 .0 5 )。结论　MAD2 β基因在一定程度上增强了人亲本胃癌细胞SGC790 1对化疗药物的耐受性 ,其可能的机制为肿瘤细胞在化疗药物作用下 ,有丝分裂出现异常 ,耐药细胞通过调控MAD2