基因工程表达产物的体外酰胺化加工

被引：8

作者：

杨宇虹

陈虎

俞超

曾嵘

崔大敷

吴祥甫

李伯良

机构：

[1] 中国科学院上海生物化学研究所!上海

[2] 中国科学院上海

来源：

生物化学与生物物理学报 | 2000年 / 03期

关键词：

人降钙素; 基因工程表达; 重组酰胺化酶; 体外酰胺化加工;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以C端为甘氨酸的修饰型人降钙素 (mhCT Gly)的融合蛋白为底物和利用重组酰胺化酶 ,研究建立基因工程表达产物的体外酰胺化加工系统。首先 ,人工合成mhCT Gly基因 ,并构建其融合表达质粒 pGEXCT ,在大肠杆菌中获得了高效表达并通过亲和层析分离纯化获得谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合蛋白 (GST mhCT Gly)。同时 ,从稳定表达大鼠酰胺化酶的CHO细胞株中制备了重组酰胺化酶。然后 ,利用此重组酰胺化酶对GST mhCT Gly进行体外酰胺化加工研究。特异性抗体免疫结合实验和质谱鉴定结果表明 ,融合表达蛋白GST mhCT Gly已被重组酰胺化酶酰胺化加工修饰。

引用

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