miR-451对肺癌细胞的增殖抑制及其靶基因的初步鉴定

被引：5

作者：

武天慧 ^{[1
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彭睿 ^{[2
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彭惠民 ^{[3
]}

罗勇军 ^{[4
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姚莉 ^{[1
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孙艳 ^{[1
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尹频 ^{[1
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文利 ^{[1
]}

张政 ^{[1
]}

机构：

[1] 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室

[2] 重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室

[3] 重庆医科大学基础医学院实验教学中心

[4] 第三军医大学高原军事医学系军事医学地理学教研室

来源：

第三军医大学学报 | 2015年 / 37卷 / 18期

关键词：

肺癌; 微小RNA; 细胞增殖;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.201412210

中图分类号：

R734.2 [肺肿瘤];

学科分类号：

100117 [系统生物医学];

摘要：

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对非小细胞肺癌细胞增殖的作用及调控机制。方法 Lipofectamine 2000转染已构建成功的miR-451真核表达载体至非小细胞肺癌细胞A549,通过MTT检测肺癌细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,运用生物信息学技术对miR-451预测靶基因进行GO分析和KEGG信号途径分析,对炎症相关的预测靶基因PSMB8进行进一步的验证。构建含有PSMB8 3'UTR野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶检测A549细胞PSMB8表达水平,Western blot检测PSMB8和NOS2的表达情况。结果 MTT结果显示过表达miR-451能显著抑制A549细胞增殖。流式细胞术检测发现miR-451组细胞阻滞在G2期,而细胞凋亡未见明显差异。GO分析发现miR-451预测靶基因涉及PSMB8、CAB39、YWHAZ等17个基因,PSMB8主要参与细胞代谢调控,细胞周期与细胞增殖;KEGG信号途径分析结果显示靶基因主要涉及microRNA在细胞周期、PI3KAKT、m TOR等信号通路。17个miR-451预测靶基因进行生物信息学研究发现PSMB8含有miR-451的结合位点,且在多个物种中呈高度保守。荧光素酶活性检测发现,过表达miR-451可抑制PSMB8荧光素酶活性表达。Western blot结果发现过表达miR-451的A549细胞PSMB8呈下调,而低表达miR-451的正常支气管上皮16HEB细胞PSMB8呈上调。Western blot和细胞荧光免疫化学检测发现炎症因子NOS2在肺癌中表达也降低。结论 miR-451可能通过靶向炎症相关基因PSMB8/NOS2调控非小细胞肺癌细胞增殖,并参与肺癌的发生与发展。

引用

页码：1823 / 1829

页数：7

共 11 条

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