HPLC-DAD-TOF/MS法测定小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量

目的:建立小柴胡汤药材中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸含量测定的方法。方法:采用HPLC-DAD-TOF/MS,Agilent Zorbax XDB-C18柱（2.1 mm×50 mm,1.8μm）,水（0.025%甲酸）-甲醇（0.025%甲酸）为流动相,梯度洗脱,流速为0.15 ml·min-1,柱温为25℃,进样量0.25μl;质谱条件为电喷雾电离源（ESI）,正离子监测,毛细管电压为4000 V,干燥气流速为10.0 L·min-1,干燥气温度为350℃,雾化器压力为40 psi（275792 Pa）,裂解器电压为200 V,用于定量分析的柴胡皂苷a离子为m/z 803.4200～803.4900。黄芩苷和甘草酸检测波长分别是275 nm和250 nm。结果:柴胡皂苷a线性范围为0.2116～127.3μg·ml-1,线性方程为Y=461182X+2000000（r=0.9990）。黄芩苷线性范围为0.758～455μg·ml-1,线性方程Y=5.9789X-27.418（r=0.9995）。甘草酸单铵盐线性范围为2.268-136.8μg·ml-1,线性方程Y=0.9499X- 1.0464（r=0.9995）。高、中、低浓度的柴胡皂苷a平均回收率分别为（95.54±1.60）%、（99.39±3.97）%、（103.8±1.97）%和黄芩苷平均回收率分别为（102.3±0.47）%、（100.9±1.32）%、（97.15±2.10）%及甘草酸单铵盐平均回收率分别为（102.6±1.96）%、（100.3±3.12）%、（97.75±1.25）%。日内、日间RSD均<5%,21 d内稳定性试验结果表明RSD均<5%。小柴胡汤中柴胡皂苷a、黄芩苷和甘草酸的含量分别为0.7500、10.65和2.572 mg/g。结论:该方法简便、灵敏、快速、准确,适用于小柴胡汤的质量控制。