AKT/eNOS信号途径在脑源性神经营养因子诱导内皮细胞血管新生中的作用

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进内皮细胞血管新生的机制及其参与的信号通路,为抗多发性骨髓瘤血管生成的研究提供新的实验依据方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对象,采用 Western blot 印迹法检测细胞内磷酸化丝/苏氨酸激酶(AKT)、内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)蛋白质的表达;采用 Transwell 小室迁移实验、小管形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,小鼠体内 Matrigel plug 实验评估体内内皮细胞血管新生的能力,采用硝酸还原酶法检测HUVEC 上清中内皮细胞源性一氧化氮(eNO)的含量,FITC-Annexin V/PI 双染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果 BDNF 以时间-浓度依赖性的方式激活 P13K/AKT/eNOS 信号通路,应用 P13K 激酶抑制剂 Ly294002可以明显阻断 BDNF 刺激后内皮细胞 eNO 的生成在体外,BDNF 诱导的细胞迁移和小管形成效应均分别能被 Ly294002和 L-NAME(NOS 抑制剂)阻断;而 BDNF 的抑制凋亡效应与 L-NAME 无关,仅受 Ly294002影响;在体内,经L-NAME 喂养的小鼠皮下 Matrigel 栓中的新生血管数量与未经 L-NAME 喂养的小鼠相比显著减少结论 BDNF 通过 AKT/eNOS 途径活化介导血管新,这可能成为治疗多发性骨髓瘤血管新生的新靶点。