非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

被引：31

作者：

李洪利 ^{[1
,2
]}

曹金山 ^{[1
]}

王君玮 ^{[2
]}

张维 ^{[2
]}

机构：

[1] 内蒙古农业大学兽医学院

[2] 中国动物卫生与流行病学中心

来源：

中国畜牧兽医 | 2012年 / 39卷 / 06期

关键词：

非洲猪瘟; ASFV; 荧光定量PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

S858.28 [猪];

学科分类号：

摘要：

本研究为了建立一套检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的23株编码ASFV结构蛋白p72的基因序列,设计引物和探针,优化退火温度、Mg2+浓度和引物、探针浓度,生成标准曲线,进行重复性、敏感性、特异性试验,并检测样品。结果显示,优化的退火温度为60℃,Mg2+终浓度为4mmol/L,引物、探针终浓度分别为0.8、0.3μmol/L。重复性试验变异系数均小于1.3%,敏感性试验最低能够检测到10拷贝/μL的质粒,以其他5种猪病病毒和ASFV质粒为模板进行特异性试验,只有ASFV质粒出现扩增曲线。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法是快速、灵敏、特异的检测ASFV的方法。

引用

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