目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮对库普弗细胞中LPS诱导的IκB激酶-β(IKK-β)表达以及对NASH大鼠肝组织核因子-κB(NF-κB)活性和环氧合酶-2(COX-2)表达水平的影响及意义。方法采用Ⅳ型胶原酶消化和密度梯度离心的方法分离纯化正常Wistar大鼠库普弗细胞,并应用LPS(1μg/ml)及不同浓度的罗格列酮(10 nmol/L和50 nmol/L)干预培养,收集细胞及培养上清液。体内实验:健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,后者以高脂饲料(2%胆固醇+10%猪油+5%玉米油)喂养复制NASH大鼠动物模型,造模成功后,分别以1 mg·kg-1·d-1、4mg·kg-1·d-1剂量的罗格列酮和等容积等渗盐水灌胃,实验结束后采集大鼠血清和肝组织标本。RT-PCR检测库普弗中细胞IKK-β、肝组织中COX-2 mRNA的表达,Western blot和电泳迁移率改变分析(EMSA)分别检测库普弗细胞中IKK-β蛋白表达和肝组织NF-κB活性变化,ELISA检测细胞培养上清液及血清中TNFα水平。结果LPS可显著增高体外培养库普弗细胞中IKK-βmRNA、蛋白的表达及上清液中TNFα水平。模型组大鼠肝组织COX-2 mRNA和蛋白的表达均较正常对照组增强,NF-κB活性与COX-2的表达和血清TNFα水平呈正相关。罗格列酮体外可抑制LPS诱导库普弗细胞中IKK-βmRNA和蛋白的表达,体内通过抑制肝组织NF-κB活化,减少COX-2表达,均表明罗格列酮可通过抑制炎症细胞活化,下调炎症介质基因表达,从而减少了NFα等炎症介质合成、释放,抑制肝脏炎症反应。结论PPAR-γ特异性激动剂罗格列酮通过干预IKK-β/IκB/NF-κβB/TNFα信号通路而发挥抗炎作用,从细胞分子水平逆转NASH大鼠肝组织的炎症反应,这为临床上有效治疗NASH提供了新思路。
