禽流感病毒HA基因的分子克隆和测序

血凝素 （HA）是禽流感病毒诱导机体产生保护性体液免疫反应的主要靶抗原。本研究的目的是克隆HA基因 ,为以后的表达及基因工程疫苗的研制奠定基础。收获接毒鸡胚的尿囊液 ,超速离心沉淀病毒 ,采用异硫氰酸胍法提取病毒RNA ,利用反转录_聚合酶链式反应 （RTPCR）技术扩增出禽流感病毒 （H9N2亚型 ）血凝素的cDNA。PCR产物加A尾后 ,用玻璃奶试剂盒回收纯化目的片段 ,通过TA连接将加尾PCR产物连接到线状克隆载体pGEMTeasyvector,转化DH5α感受态细胞 ,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆 ,提取质粒 ,经酶切鉴定 ,对目的片段进行测序 ,结果获得了HA基因全长 ,约 1.7kb ,与已知序列进行同源性比较 ,同源性最高的可达 97% ,所克隆的基因为禽流感HA基因工程疫苗的研究奠定了基础。