重组抗原CP4-EPSPS的表达及免疫学活性研究

被引：4

作者：

唐霓 ^{[1
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Yu Xiang ^{[2
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Helen Ke ^{[2
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Zhihui Yao ^{[2
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敬凌霞 ^{[1
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黄爱龙 ^{[1
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郑建 ^{[1
]}

机构：

[1] 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所

[2] 加拿大Artron Bioresearch Inc

来源：

重庆医科大学学报 | 2006年 / 01期

关键词：

CP4-EPSPS; 快速检测; 亲和层析; 纯化;

D O I：

10.13406/j.cnki.cyxb.2006.01.003

中图分类号：

R392.1 [免疫生物学];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

目的:表达并纯化重组CP4-EPSP合成酶(CP4-EPSPS),研究重组CP4-EPSPS的免疫学活性;为进一步制备单克隆抗体和开发检测CP4-EPSPS的快速诊断试剂奠定基础。方法:诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS的重组载体pET-EPSPS,经Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,以ELISA、胶体金试条、W estern杂交鉴定其免疫活性。结果:重组CP4-EPSPS以包涵体表达为主,上清表达量极低,但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS抗原活性强;复性包涵体的抗原性与上清的抗原性明显不同。采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法,从上清中纯化CP4-EPSPS获得成功,ELISA检测此重组抗原免疫小鼠血清抗体滴度可达到1:625,000;W estern杂交证实重组抗原免疫血清与CP4-EPSPS标准品有较好的免疫反应性。结论:包涵体的简单复性方法难以恢复其关键的抗原决定簇的免疫原性;运用胶体金试纸条检测重组CP4-EPSPS活性,灵敏度高,简单快捷,对CP4-EPSPS特异检测相关的关键性抗原决定簇的甄别有重要作用,可指导重组抗原的纯化和在免疫学研究、特别是在单克隆抗体开发中的应用。

引用

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共 3 条

[1] 进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆中CP4-EPSPS基因的检测比较研究 [J].