降钙素原抗原的表达及其抗体的制备与初步鉴定

被引：9

作者：

刘琦 ^{[1
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郭艳茹 ^{[1
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刘莹 ^{[1
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柳晓兰 ^{[1
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刘静 ^{[1
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仲飞 ^{[2
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高建恩 ^{[1
]}

孙启鸿 ^{[1
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机构：

[1] 蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心军事医学科学院放射与辐射医学研究所

[2] 燕山大学研究生院

来源：

细胞与分子免疫学杂志 | 2008年 / 08期

关键词：

降钙素原; 原核表达; 抗体制备; 鉴定;

D O I：

10.13423/j.cnki.cjcmi.004785

中图分类号：

R392.11 [免疫分子生物学（免疫化学）];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

目的:构建降钙素原(PCT)原核表达载体,制备其多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:以甲状腺癌细胞cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PCT和PET-32a-PCT,在大肠杆菌中分别表达GST-PCT和His-PCT融合蛋白,用His-PCT免疫家兔和BALB/c小鼠制备兔pAb和鼠mAb。通过ELISA法测定抗人PCT抗血清效价;用Western blot、间接免疫荧光鉴定pAb的特异性。使用间接ELISA法筛选分泌特异性抗PCT的杂交瘤细胞株,采用Western blot和间接免疫荧光鉴定mAb的特异性。结果:构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-PCT和PET-32a-PCT,并在大肠杆菌中表达、纯化。经ELISA法测得抗人PCT抗血清效价是1∶256 000。制备的抗PCT兔多克隆抗体可特异地识别重组和天然的PCT蛋白。获得8株可稳定分泌抗PCT的杂交瘤细胞株,可识别重组人PCT蛋白,其中有4株可特异性结合TT细胞质中的天然蛋白。结论:成功地制备出兔抗人PCT抗血清和8株抗PCT的mAb,为进一步研究PCT在严重的细菌感染和脓毒症中的病理及生理作用奠定了基础。

引用

页码：795 / 797

页数：3

共 3 条

[1]

Evaluation of serum C-reactive protein, procalcitonin, tumor necrosis factor alpha, and interleukin-10 levels as diagnostic and prognostic parameters in patients with community-acquired sepsis, severe sepsis, and septic shock[J] . European Journal of Clinical Microbiology ＆ Infectious Diseases . 2006 (8)

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Dorizzi, Romolo M. ;

Polati, Enrico ;

Sette, Piersandro ;

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Luzzani, Aldo .

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