RTP-CR和nested-PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用

根据已发表的CSFV核苷酸序列 ,设计并合成CSFV特异性PCR引物对及nested PCR引物对。从待检猪脾脏、淋巴组织或实验感染的细胞培养物中提取总RNA ,用AMV反转录酶进行反转录后 ,进行PCR扩增 ,一扩产物再用nested PCR引物对进行二次扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。进一步将该片段纯化回收后 ,克隆到T载体并进行测序。测序结果同已知的CSFV、BVDV和BDV核苷酸序列进行同源性比较分析 ,既可快速、准确地区别于BVDV和BDV ,又可以确定CSFV的血清型。该方法可有效用于猪瘟的病理学和流行病学研究。