猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定

被引：18

作者：

赵华梅 ^{[1
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潘秀珍 ^{[1
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王长军 ^{[2
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郭恒彬 ^{[2
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李先富 ^{[2
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唐家琪 ^{[2
]}

机构：

[1] 南京师范大学生命科学学院

[2] 南京军区军事医学研究所流行病研究室

来源：

中国人兽共患病学报 | 2006年 / 01期

基金：

国家科技攻关计划;

关键词：

猪链球菌2型; 谷氨酸脱氢酶; GDH家族I; NADP(H)-特异性GDH;

D O I：

暂无

中图分类号：

R378 [病原细菌];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性。方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性。结果PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成。结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH。

引用

页码：22 / 25

页数：4

共 3 条

[1] 猪链球菌引起人中毒性休克综合征和脑膜脑炎的流行病学调查及病原学研究 [J].

唐家琪 ;

朱进 ;

郭恒彬 ;

胡晓抒 ;

朱凤才 ;

刘光中 .

第三军医大学学报, 2001, (11) :1292-1295

[2] 人猪链球菌感染性综合征研究 [J].

胡晓抒 ;

朱凤才 ;

汪华 ;

陈宋义 ;

王广和 ;

孙建中 ;

华春涛 ;

杨华富 .

中华预防医学杂志, 2000, (03) :23-25

[3]

Evolution of glutamate dehydrogenase genes: Evidence for two paralogous protein families and unusual branching patterns of the archaebacteria in the universal tree of life[J] . Nadia Benachenhou-Lahfa,Patrick Forterre,Bernard Labedan.Journal of Molecular Evolution . 1993 (4)

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