基于环式等温扩增的烟草青枯病病原菌快速检测方法

被引：7

作者：

贾蒙骜 ^{[1
]}

陈兴江 ^{[1
]}

林叶春 ^{[1
,2
]}

商胜华 ^{[1
]}

机构：

[1] 贵州省烟草科学研究院烟草行业烟草分子遗传重点实验室

[2] 中国农业大学农学与生物技术学院

来源：

中国农业大学学报 | 2014年 / 19卷 / 01期

关键词：

烟草; 茄科劳尔氏菌; fliC基因; 环介导的等温扩增;

D O I：

暂无

中图分类号：

S435.72 [烟草病虫害];

学科分类号：

090401 ; 090402 ;

摘要：

针对烟草青枯病的防控,开发快速、高效的病原菌检测方法是必要的。环式等温扩增(LAMP)是一种在等温条件下快速完成靶标基因扩增的新方法。将青枯病菌贵州分离株FQY4基因组序列(NCBI号:CP004013)与其他已发表菌株序列比对分析,确定编码鞭毛蛋白的fliC基因的保守区域可被选作检测靶标。根据LAMP原理以及靶标序列的特点,设计了一组由6条引物组成的环式等温扩增反应体系。结果表明:61℃条件下孵育45min,可完成对青枯病病原菌单菌落和带菌烟草叶片的检测,结果判定可以通过颜色变化被肉眼直接识别,也可以通过琼脂糖凝胶电泳检测。通过这种新方法,可以实现对青枯病菌菌落的快速鉴别,还可以用于对田间疑似带病烟草植株的快速检测。

引用

页码：93 / 98

页数：6

共 18 条

[1]

Genome sequence of the plant pathogen Ralstonia solanacearum. Salanoubat M,Genin S,Artiguenave F,Gouzy J,Mangenot S,Arlat M,Billault A,Brottier P,Camus J C,Cattolico L,Chandler M,Choisne N,Claudel-Renard C,Cunnac S,Demange N,Gaspin C,Lavie M,Moisan A,Robert C,Saurin W,Schiex T,Siguier P,Thébau. Nature . 2002

[2] 烟草青枯病研究进展 [J].

霍沁建 ;

张深 ;

王若焱 .

中国农学通报, 2007, (08) :364-368

[3]

烟草青枯病菌的分子检测与烟草品种抗病性研究[D]. 贾春燕.山东农业大学 2011

[4] Development of a Sensitive Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay That Provides Specimen-to-Result Diagnosis of Respiratory Syncytial Virus Infection in 30 Minutes [J].

Mahony, James ;

Chong, Sylvia ;

Bulir, David ;

Ruyter, Alexandra ;

Mwawasi, Ken ;

Waltho, Daniel .

JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, 2013, 51 (08) :2696-2701

[5]

Erwinia amylovora loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for rapid pathogen detection and on-site diagnosis of fire blight[J] . &nbspJournal of Microbiological Methods . 2012

[6]

Real-time turbidimetry of LAMP reaction for quantifying template DNA[J] . Yasuyoshi Mori,Masataka Kitao,Norihiro Tomita,Tsugunori Notomi. &nbspJournal of Biochemical and Biophysical Methods . 2003 (2)

[7] Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers [J].

Nagamine, K ;

Hase, T ;

Notomi, T .

MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 2002, 16 (03) :223-229

[8] Detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by turbidity derived from magnesium pyrophosphate formation [J].

Mori, Y ;

Nagamine, K ;

Tomita, N ;

Notomi, T .

BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, 2001, 289 (01) :150-154

[9]

A real-time PCR assay for the quantitative detection of Ralstonia solanacearum in the horticultural soil and plant tissues. Chen Yun,Zhang Wen-Zhi,Liu Xin,Ma Zhong-Hua,Li Bo,Allen Caitilyn,Guo Jian-Hua. Journal of microbiology and biotechnology . 2010

[10]

Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Notomi T,Okayama H,Masubuchi H,Yonekawa T,Watanabe K,Amino N,Hase T. Nucleic Acids Research . 2000

← 1 2 →