牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌多重PCR快速检测方法的建立

被引：8

作者：

肖淦文 ^{[1
,2
]}

陈颖钰 ^{[3
]}

彭清洁 ^{[4
]}

胡长敏 ^{[2
]}

崔朋 ^{[1
,2
]}

巴晓亮 ^{[1
,2
]}

陈焕春 ^{[1
,2
]}

郭爱珍 ^{[1
,2
]}

机构：

[1] 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

[2] 华中农业大学动物医学院

[3] 华中农业大学动物科技学院

[4] 武汉科前动物生物制品有限公司

来源：

中国奶牛 | 2012年 / 21期

关键词：

多重PCR; 牛支原体; 多杀性巴氏杆菌A型; 化脓隐秘杆菌; 牛呼吸疾病综合征;

D O I：

暂无

中图分类号：

S858.23 [牛];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

本试验旨在建立一种可同时鉴别牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌的多重PCR方法。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyaC—hyaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16S rRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物,多重PCR的最佳扩增条件确定为:95℃10min预变性;95℃1min,56℃50s,72℃1min,循环30次;72℃10min延伸。结果表明,该多重PCR方法可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段,不能扩增出其他病原菌的相关片段;对多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低检测浓度分别为8×105CFU/mL、8×105CFU/mL和4×106CFU/mL。同时用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织,发现12h预增菌后,肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92%。对临床样本进行牛支原体分离培养需要3～4d时间,而采用多重PCR方法检测12h预增菌则能在24h内出结果。该多重PCR方法显著加快了临床诊断速度,具有推广应用价值。

引用

页码：4 / 9

页数：6

共 7 条

[1] 牛呼吸疾病综合征及其防治 [J].

郭爱珍 .

中国奶牛, 2011, (24) :7-11

[2] 牛化脓性隐秘杆菌病PCR诊断方法的建立 [J].

王密 ;

周玉龙 ;

朴范泽 .

微生物学通报, 2010, 37 (09) :1320-1324

[3] 牛支原体病研究进展 [J].

胡长敏 ;

石磊 ;

龚瑞 ;

白智迪 ;

郭爱珍 .

动物医学进展, 2009, 30 (08) :73-77

[4] 肉牛传染性牛支原体肺炎流行的诊断 [J].

石磊 ;

龚瑞 ;

尹争艳 ;

周勇 ;

裴洁 ;

胡智斌 ;

王利霞 ;

胡长敏 ;

刘涛 ;

陈颖钰 ;

廖娟红 ;

赵俊龙 ;

陈焕春 ;

郭爱珍 .

华中农业大学学报, 2008, (05) :629-633

[5]

Update on bacterial pathogenesis in BRD[J] . Anthony W. Confer. Animal Health Research Reviews . 2009 (2)

[6]

Pasteurella multocida and bovine respiratory disease[J] . S. M. Dabo,J. D. Taylor,A. W. Confer. Animal Health Research Reviews . 2007 (2)

[7] Species identification of Mycoplasma bovis and Mycoplasma agalactiae based on the uvrC genes by PCR [J].

Subramaniam, S ;

Bergonier, D ;

Poumarat, F ;

Capaul, S ;

Schlatter, Y ;

Nicolet, J ;

Frey, J .

MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 1998, 12 (03) :161-169

← 1 →