聚合酶链反应和DNA探针联合检测临床标本中结核杆菌的研究

目的为提高聚合酶链反应(PCR)检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性。方法首先通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,然后用Southern法转移至膜上,与地高辛标记的人型结核杆菌DNA探针杂交。结果 PCR电泳检测的灵敏度为1pg,而DNA探针检测将灵敏度提高到100fg。24种受试菌株中,只有结核分支杆菌复合体和蟾分支杆菌有245hp扩增带,其中牛型结核分支杆菌与188bp探针不杂交。对225例临床标本进行涂片、PCR电泳和探针检测,51例非结核性标本三者均阴性;1例非结核分支杆菌感染者的痰标本涂片和培养均阳性,PCR电泳和探针检测均阴性。菌种鉴定为快生长分支杆菌;173例结核性标本三者阳性率分别为16.2%、37.6%和50.3%。此外,将PCR电泳图谱分为四型,并探讨了其影响因素。结论结果表明PCR是结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段,而与探针联合检测可提高阳性检出率,避免漏判和误判。