温敏核不育水稻5460S细菌人工染色体文库的构建和鉴定

被引：9

作者：

邱芳

金德敏

伏健民

张超良

谢纬武

杨仁崔

张洪斌

王斌

机构：

[1] 中国科学院遗传研究所!北京

[2] 福建农业大学作物遗传育种研究所!福州

[3] DepartmentofSoilandCropSciences

[4] TexasA&MUniversity!Te

来源：

中国科学C辑:生命科学 | 1999年 / 05期

关键词：

水稻; 温敏核不育基因; 细菌人工染色体文库; 热不对称性交错PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

摘要：

为了构建温敏核不育 (TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因 ,以温敏核不育水稻 5 46 0S为材料 ,摸索优化了构建植物细菌人工染色体 (BAC)文库的方法 ,构建了一个高质量的BAC文库 .该文库由 1 95 84个克隆构成 ,插入片段平均长度为 1 1 0kb ,相当于水稻单倍体基因组大小的 5倍 ;以分子量分别为 1 40和2 5 0kb的 2个大BAC克隆进行稳定性传代实验 ,经 1 0 0代传代后其插入的DNA片段仍然稳定存在 ;以线粒体和叶绿体基因为探针筛选BAC文库 ,未检验出叶绿体和线粒体DNA的污染 ;以和tms1基因连锁的 3个分子标记作为探针对BAC文库进行了筛选 ,每个探针至少可获得一个阳性克隆 ,利用热不对称性交错PCR(Tail PCR)法成功分离了阳性克隆的左右末端序列 .

引用

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