细胞色素c氧化酶可溶性CuA结构域的表达、分离纯化和初步表征

被引：3

作者：

李连之

宋爱新

谢毅

黄仲贤

E.de Waal

U.Kolczak

G.wCanters

机构：

[1] 复旦大学化学系化学生物学实验室

[2] 上海

[3] 复旦大学生命学院遗传学国家重点实验室

[4] Leiden Institute of Chemistry

[5] Leiden University

[6] ! P O Box

[7] RA L

来源：

科学通报 | 2001年 / 12期

关键词：

细胞色素c氧化酶; CuA结构域蛋白; 基因表达; 分离纯化; 光谱性质;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q55 [酶];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

细胞色素ｃ氧化酶亚基Ⅱ含有可溶性双核铜中心ＣuＡ结构域蛋白．报道了Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ菌ＣuＡ结构域的基因克隆、表达和分离纯化及其初步表征．编码ＣuＡ结构域的基因插入 pＥＴ１１ｄ质粒载体中，于Ｅ．ｃｏｌi ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行表达．结果表明，ＣｕＡ结构域蛋白在这个表达体系中主要以包涵体的形式存在，表达量占菌体总蛋白的１０％左右．经尿素溶解，Ｃｕ～＋／Ｃｕ～２＋重组复性，Ｑ－Ｓｅpｈａｒｏｓｅ快速阴离子交换柱和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶过滤柱纯化，得到了电泳纯的紫红色可溶性蛋白．紫外-可见吸收光谱在４７８nm有较强吸收峰，５３０nm处有一肩峰，在３６０和８０６ nm处有弱吸收峰，它们可归属为混价双金属核中心（Ｃｕ２Ｓ２Ｒ２）中Ｃu－Ｃu和Ｃu－Ｃu间的电荷转移与轨道相互作用．圆二色谱表明其二级结构主要为β－折叠形式．荧光激发谱最大波长为２８０nm，发射谱最大波长为３４５ nm．

引用

页码：1005 / 1008

页数：4

共 11 条

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