切取沙打旺无菌苗下胚轴接入固体M5培养基(MS+0.2 mg/1生物素+1 mg/1泛酸钙+1 mg/1 2,4-D+0.7 mg/1 BA+0.2 mg/l NAA)上形成愈伤组织,选用褐绿相间的愈伤组织放入液体CM2培养基(M5+1.3 g/l“1640”)中振荡暗培养。每隔15天换一次液,经过4次换液,用400目网过滤得到大量单细胞。取出单细胞进行双层静止暗培养,每隔7—10天加一次液,一个半月形成小块愈伤组织。然后转入固体M5培养基中增殖,20天形成大块愈伤组织,再转入分化培养基MF2(M5去掉2,4-D)中,一个月左右分化出苗,将苗转入生根培养基,长成完整植株。