噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌方法学研究

目的　建立噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌试验方法 ,探讨最佳检测条件。方法　应用分枝杆菌噬菌体感染结核分枝杆菌 ,比较各种检测条件对测定结果的影响 ,并将所建方法用于痰标本检测 ,结果与BIOTECLab公司产品比较。结果　 1× 10 9噬菌斑形成单位 (PFU) /ml的噬菌体 ,37℃感染 6 0min可检出 2 0 0～ 5 0 0条 /ml结核分枝杆菌。杀毒剂 10 0mmol/ml,室温作用 5min可完全灭活受试噬菌体。指示细胞浓度在 1× 10 8条 /ml时 ,形成的噬菌斑清晰 ,便于计数。加热灭活的细菌和指示细胞不被噬菌体感染。H3 7Rv、H3 7Ra和牛分枝杆菌参考菌株检测结果均为阳性 ,7种非分枝杆菌和 16种常见非结核分枝杆菌检测结果为阴性 ,4种非结核分枝杆菌 (偶然、胞内、金色、草分枝杆菌 )在高浓度时 (>1× 10 5条 /ml)检测结果为阳性。重复试验结果表明 ,本法批间和批内变异系数均<15 %。痰标本氢氧化钠 半胱氨酸液化方式的阳性检出率为 94 % (49/ 5 2 ) ,显著高于氢氧化钠液化结果的 6 2 % (32 / 5 2 ,χ2 =15 0 6 ,P <0 0 1) ;预培养 1d的阳性检出率为 6 5 % (5 1/ 78) ,显著高于未预培养结果的 4 0 % (31/ 78,χ2 =18 0 5 ,P <0 0 1)。临床标本检测结果表明 ,我们的试剂与进口试剂检测结果基本相同。结论　噬菌体