绵羊冷冻胚胎移植成功

以成年寒羊母羊做供、受体。使用 FSH(300单位)和 LH(150单位),进行供体超数排卵,并在发情周期的第6～8天(发情开始当天=0天)用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)+5%失活犊牛血清,冲洗子宫角手术采卵。只有形态正常的胚胎用于冷冻。胚胎冻前分6步(0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M 和1.5M,每种浓度停留7～10分钟)添加抗冻剂(DMSO)。解冻后也分6步(1.5M、1.25M、1.0M、0.75M 和0.25M,每种浓度停留10分钟)除去 PBS 液中的 DMSO。胚胎在盛有0.25～0.3毫升 PBS 液(Whitting-ham,1971)的安瓿(容量1.0毫升)中冷冻,PBS 液含1.5M 的 DMSO。自1979年8月24日至12月27日,胚胎的冷冻和移植试验分三批进行。第一批胚胎是按 Willadsen(1976)冷冻羊胚胎的方法冷冻的,并降温至-120℃时将安瓿移入液氮。安瓶从-80℃--5℃,以12℃/分钟的速度解冻,从-5℃放入手中快速升温解冻。第二和第三批,胚胎是按 Willadsen(1978)所述及的牛胚胎冷冻和解冻方法进行的,并降温至-60℃将安瓿直接投入液氮。将安瓶放入-50℃的酒精浴中,以4℃/分钟的速度解冻至-10℃。从-10℃将安瓿放入手中快速解冻。第三批试验的受体根据母羊的健康和繁殖情况进行了挑选。共49个胚胎(47个形态正常的和2个形态异常的)移入23只受体,4只母羊妊娠。其中一只受体早产,羔羊死亡;一只受体母羊产了3只羊羔,共产了五只羊羔。三批试验的受体妊娠率和胚胎成活率分别如下:0%(0/8)、0%(0/18)、11.1%(1/9)、6.2%(1/16)和50%(3/6)、33.3%(5/15)。