新生小鼠心肌细胞培养模型的建立及其在毒性评价研究中的应用

目的建立简单实用和重复性好的新生小鼠心肌细胞体外培养方法,构建体外心肌细胞模型用于外源化合物的心肌毒性评价。方法取当天出生的小鼠心脏,用胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和分散酶消化心室肌组织,用差速贴壁和化学方法纯化心肌细胞,用此细胞模型评价镰刀菌毒素丁烯酸内酯(BUT)的心肌毒性作用。结果新生小鼠心肌细胞培养3d后,大部分细胞开始搏动,随培养时间的延长,心肌细胞胞体逐渐增大。经α-actin抗体免疫组织化学鉴定,心肌细胞的纯度为96%。持续培养90d后,心肌细胞仍保持较好的搏动频率。经BUT染毒后,心肌细胞存活率随BUT浓度的增加而逐渐下降,对心肌细胞的损伤在形态上主要表现为细胞水肿、空泡样变性、肌纤维断裂等。结论该实验建立的新生小鼠心肌细胞体外培养方法,单细胞收获率和心肌细胞纯度高,心肌细胞搏动时间长。BUT对心肌细胞有较强的毒性作用并呈明显的量-效关系。