MTT显色反应实验条件分析

目的 :检验分析MTT实验方法本底高、灵敏度低、稳定性差的影响因素 ,改进实验条件提高灵敏度和稳定性 ,降低本底。方法 :用MTT比色方法 ,细胞毒试验及细胞增殖实验 ,分析比较不同条件下MTT显色反应的性能特点。结果 :比较了 13种溶剂对Formazan的溶解性能。分析检验了琥珀酸脱氢酶在细胞上的分布特点、pH值对MTT反应体系的影响、酚红和牛血清对检验结果的影响 ,提出相应对策。检测了MTT反应时间曲线和细胞活力曲线。分析了改进后的MTT实验方法的灵敏度和稳定性。结论 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面。MTT反应体系的pH值为 6 7,比较好的Formazan溶剂是正丙醇、异丙醇和乙二醇乙醚。去掉细胞培养上清 ,检测细胞上的酶 ,用溶剂使蛋白质变性 ,经沉淀去掉蛋白质影响 ,能使MTT实验方法的本底降低 ,灵敏度提高。通常情况下该方法检测K 5 62细胞和人淋巴细胞的灵敏度分别为 10 0 0和 10 0 0 0个细胞左右。