流式细胞术检测小鼠脾细胞内细胞因子刺激方案的筛选

目的建立流式细胞术检测小鼠细胞内细胞因子的方法。方法取5只BALB/c小鼠建立哮喘模型,4周后处死,制备脾脏单个核淋巴细胞悬液,分别按A、B、C3个刺激方案培养。A方案组:用25ng/mlPMA、1μg/mlIonomy-cin以及10μg/mlBFA刺激4h;B方案组用50ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin以及10μg/mlBFA刺激4h;C方案组用3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA后继续刺激5h。培养后各组细胞悬液根据检测目的分成若干检测管,结合固定破膜处理技术,进行细胞表面抗原CD4及细胞内因子IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ染色,用流式细胞仪分析,比较不同刺激条件下各种细胞内因子的表达情况。实验设未刺激对照、激活对照、胞内染色对照及同型对照。结果 A方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.96±1.199)%,IFN-γ为(7.98±3.939)%,IL-10为(4.78±2.366)%,IL-5表达率均低于1%;B方案组中5只鼠的细胞内因子表达率IL-4为(5.76±1.108)%,IFN-γ为(7.44±2.269)%,IL-10为(4.50±1.560)%,IL-5表达率均低于1%;C方案组5只鼠IL-10、IL-5表达率分别为(3.14±0.288)%和(6.82±1.996)%。结论 25ng/mlPMA、1μg/mlIonomycin及10μg/mlBFA刺激4h的方案较适合小鼠淋巴细胞IL-4、IFN-γ的检测;3μg/mlConA刺激2d,加入10μg/mlanti-CD3、2μg/mlanti-CD28和10μg/mlBFA继续刺激5h的方案适合IL-5、IL-10的检测,并且均是从单个核细胞水平对细胞内因子进行检测。