应用噬菌体随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位

目的探索利用特异多克隆抗体结合噬菌体递呈（ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ）随机肽库，进行病原体蛋白质的Ｂ细胞抗原表位研究。方法采取特异抗原→特异多克隆抗体→相应抗原表位的技术路线。所选研究对象为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白。实验分三步：（１）抗ＨＣＶ核心蛋白多克隆抗体的制备。用活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ耦联重组的ＨＣＶ核心蛋白，亲和层析纯化丙型肝炎病人血清中特异的抗核心蛋白多克隆抗体。（２）随机肽库的生物淘洗（ｂｉｏｐａｎｎｉｎｇ）。以纯化的多克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体递呈的随机七肽库。（３）阳性噬菌体克隆的鉴定。将筛选的噬菌体克隆进行ＥＬＩＳＡ检测、ＤＮＡ测序以及竞争抑制试验等，最后分析所获资料。结果七肽氨基酸序列分析表明，ＨＣＶ核心蛋白存在着至少３个Ｂ细胞抗原位点，其中１９～２５ａａ间（ＰＱＤＶＫＦＰ）的线性表位是该蛋白的优势表位，证实了本研究策略的可行性。结论本技术路线可以有效地进行ＨＣＶ核心蛋白的Ｂ细胞抗原表位研究。由此推论，此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究，继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据