电穿孔法对分枝杆菌进行高效基因转化

目的 :探讨卡介苗 (BacilleCalmette Guerin ,BCG)分枝杆菌的电穿孔转化方法及其影响因素。方法 :在基因脉冲仪上用电穿孔法对快生长型耻垢分枝杆菌———M .Smegmatismc2 15 5和BCG电转化大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒ME 6 5。结果 :电穿孔法可以成功地转化两种分枝杆菌 ,筛选出卡那霉素抗性菌株。通过对转化子提取质粒进行酶切鉴定和PCR扩增均证明为阳性重组体。转化效率达 10 4 / μgDNA。重组质粒可以在分枝杆菌中稳定复制。初步结果表明 ,质粒DNA的构象和浓度、初始培养物的浓度和活力、电转化参数包括电压、电阻以及转化前对菌体的冰浴时间等都对转化效率有一定的影响。结论 :BCG重组疫苗研制中分枝杆菌的基因转化问题的解决为研制能表达分枝杆菌及其它感染性疾病或肿瘤抗原的BCG多价重组疫苗提供了实验基础。