SV40LTag诱导鼠骨骺软骨细胞稳定分化的实验研究

目的建立稳定分化大鼠骨骺软骨细胞株,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓提供稳定的细胞来源。方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原(simian virus 40 large T antigen gene,SV40LTag)基因的质粒pEGFP-IRES2-SV40LTag转染原代培养的新生大鼠骨骺软骨细胞,G418筛选,抗性克隆扩大培养传代。应用II型胶原、X型胶原和SV40LTag抗体进行细胞鉴定,体外检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线。用RT-PCR、Southern blot和免疫细胞化学法鉴定SV40LTag在转染细胞中的表达。结果转染后获得了阳性细胞克隆,免疫细胞化学证实为具有较强增殖能力和多分化潜能的骨骺软骨细胞。经Southern印迹杂交证实,SV40LTag已稳定转染入骨骺软骨细胞,表达mRNA及其蛋白。结论SV40LTag导入可诱导骨骺软骨细胞稳定分化,为细胞替代治疗和基因治疗小儿生长发育迟缓等疾病提供稳定的细胞来源。