LPS触发的TLR4对NF-κB和IRF3信号通路的调控差异

目的探讨脂多糖(LPS)触发的Toll样受体4(TLR4)对NF-κB和干扰素调节因子3(IRF3)信号通路的调控差异。方法 LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞,用免疫荧光法检测TLR4及两种转录因子p65及IRF3的定位,用Western blot方法检测转录因子p65和IFR3的磷酸化水平。结果巨噬细胞经LPS刺激30 min内,细胞膜上的TLR4荧光强度增加(P<0.01),胞质中TLR4荧光强度显著增加(P<0.01),且与早期内体抗原1(early endosome antigen 1,EEA1)共定位;当LPS刺激90和180 min时,胞膜和胞质内的TLR4信号均显著下降(P<0.01),与EEA1共定位的信号也明显减少(P<0.01)。静息状态下,TLR4的下游信号通路分子p65和IRF3的荧光信号均出现在胞质中;LPS刺激后,两者的荧光信号在细胞核中逐渐增加(P<0.05),但p65荧光信号比IRF3增强得更早,且更持久。p65磷酸化的修饰也明显早于IRF3,且持续时间更长。结论 TLR4活化后的定位变化导致其下游IRF3信号通路的传递时间明显延后,且比NF-κB信号通路短暂。