TaqMan荧光定量PCR技术快速检测霍乱弧菌方法的建立

目的:建立特异、灵敏、快速的TaqM an荧光定量PCR方法用于快速检测霍乱弧菌。方法:根据GenBank上的霍乱毒素(cholera toxin,CT)基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqM an探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,与副溶血性弧菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应;检测灵敏度达10 cfu/m l;反应体系具有很高的稳定性;整个操作过程仅需2 h。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适用于霍乱弧菌的日常监测和爆发疫情的应急诊断。