定点整合型基因治疗腺病毒载体的构建

目的：构建定点整合型基因治疗腺病毒载体。方法：以逐步亚克隆法将腺病毒伴随病毒的两个末端倒转重复序列与neo基因表达盒克隆至pAdE1CMV，其中HCMV启动子控制下的neo基因表达盒位于腺病毒伴随病毒两个末端倒转重复序列之间，将得到的转移载体pAdE1CMVITREXneoDNA和pJM17DNA以脂质体法共转染293细胞，G418法连续筛选重组腺病毒。以病毒核酸酶切及感染293细胞的CPE（cytopathiceffect　）观察鉴定是否获得重组腺病毒。结果：获得有腺病毒伴随病毒的两个末端倒转重复序列和位于其间的neo基因表达盒的重组腺病毒vAd－AAV。结论：重组腺病毒vAd－AAV的构建成功将为基因治疗提供定点整合型腺病毒载体。